Test rápido para el diagnóstico de la infección por el virus del Ébola

La Organización Mundial de la Salud (OMS, WHO) ha aprobado una prueba para el diagnóstico rápido de la infección por el virus Ébola Zaire, que permite detectar la infección en un tiempo de 15 minutos.(EUAL number: EA 0011-011-00).

El kit se denomina “ReEBOVTM  Antigen Rapid Test Kit” y esta manufacturado por Corgenix Medical Corporation (Broomfield, USA). Debe mantenerse a 2-8ºC y posee  una caducidad de 6 meses.

La prueba  se basa en la técnica de inmunocromatografía.  Se puede realizar con sangre, plasma o suero, cuya extracción y posterior manipulación requiere todas las normas de asepsia/ antisepsia  que requieren las muestras biológicas de estos pacientes.

Se trata como se ha dicho de una técnica de inmunocromatografíaFigura-1  que detecta la proteína VP40 del virus Ébola Zaire, que es el responsable de la actual epidemia en África. El test debe hacerse a personas con cuadro clínico y datos epidemiológicos compatibles con la infección por el virus.

El informe de la OMS no indica si permite detectar las otras especies del virus (ver en este blog el post “Brote epidémico por el virus Ébola en África occidental. 2014”)

La prueba es  sencilla,  como todas las que utilizan esta técnica, pero debe ser realizada por personal sanitario conocedor de la misma. Utiliza sangre venosa o capilar, suero o plasma  y se realiza siguiendo las instrucciones del fabricante. No requiere electricidad para su realización, por lo que puede usarse en condiciones de campaña.

La sencillez de la prueba no debe hacer olvidar las precauciones para la manipulación de estas  muestras que requieren una cabina de seguridad biológica de clase II y el uso como mínimo de guantes2

La prueba se lee a los 15 minutos  y nunca debe leerse pasados los 25 minutos; interpretándose el  resultado a la luz de los datos clínicos y epidemiológicos del paciente.

El kit evaluado con la cepa Makona de virus Ébola Zaire y comparado con una técnica de RT-PCR ha mostrado una sensibilidad de 91,8% y una especificidad del 84,6%. Se recomienda que una vez obtenido el resultado se confirme si es posible con una prueba de PCR estándar.

Figura 1. Esquema general de las pruebas de inmunocromatografía

Figura - 1

A. La prueba se realiza en una tira de nitrocelulosa a la que se han fijado diferentes anticuerpos.

1. Tira reactiva. En la parte inferior de la tira (I) hay anticuerpos de conejo dirigidos contra el antígeno buscado, a los que se ha fijado oro coloidal (Ac M). En la zona R se han adherido a la tira anticuerpos de conejo (sin marcar) contra el mismo antígeno (AcR). Más arriba, en la zona C se hallan fijados a la tira anticuerpos de cabra dirigidos contra los de conejo (AcC). Para desarrollar la prueba se sumerge la tira en la muestra clínica (orina, LCR, sangre, etc.), en la que se desea detectar la presencia de un antígeno, como se observa en la figura (B) o, alternativamente, se deposita con una pipeta unas gotas de la muestra en la parte inferior (I) de la tira.

2. Reacción positiva. En caso de positividad, el anticuerpo marcado (AcM) que está en el lugar I, reacciona con el antígeno y migra hacia arriba por capilaridad hasta que llega a la zona de reacción (R), en la que los anticuerpos fijados en esa zona (AcR) reaccionan con el antígeno y retienen al complejo migrante. Éste queda muy concentrado, pudiéndose observar por acción del oro coloidal una banda coloreada. Siempre existe un exceso de anticuerpos marcados AcM que sobrepasan la zona R para alcanzan la zona de control (C), en la que los anticuerpos fijados (AcC) captan y retienen a los anticuerpos migrantes, observándose una banda de control de migración; tanto si había antígeno específico, es decir, si la reacción es positiva como si no, por lo tanto, siempre debe aparecer la banda de control como índice de una migración correcta.

3. Reacción negativa. Se muestra la dinámica de una prueba negativa: no hay banda en R (reacción) porque los anticuerpos AcM migran sin antígeno, por lo que no pueden ser retenidos por los Ac R, pero sí son retenidos en C por los AcC (control).

B. Se muestra una detección de antígeno de rotavirus positiva (izquierda) y negativa (derecha). Para ello se han sumergido las tiras en una solución de heces en un tampón leyendo la reacción a los pocos minutos.

2http://www.who.int/csr/resources/publications/ebola/ppe-guideline/en/

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